Orphelin dès son jeune âge, Peter Parker vit dans le Queens, à New York, avec sa bien-aimée Tante May et son oncle Ben. Peter mène une vie d'étudiant ordinaire, travaillant comme photographe pour le journal scolaire, soupirant après la belle Mary Jane Watson et traînant avec son ami Harry Osborn. Lors d'un voyage scolaire, au cours duquel Peter et ses camarades reçoivent une démonstration scientifique sur les arachnides, Peter est mordu par une araignée génétiquement modifiée. Peu après, il découvre qu'il possède des pouvoirs inhabituels : il est doté de la force et de l'agilité d'une araignée ainsi que d’un « spider-sense » aigu, quasi ESP. Peter utilise d'abord ses pouvoirs pour gagner de l'argent, mais face à une tragédie qui touche de près lorsqu’on tue son oncle Ben, il promet de consacrer sa vie à lutter contre le crime, prenant à cœur les mots de son bien-aimé oncle Ben : « With great power comes great responsibility. » Pendant ce temps, un homme d’affaires mégalomane, Norman Osborn, père de Harry, subit lui aussi des transformations. Une formule expérimentale a mal tourné, augmentant son intelligence et sa force mais le poussant aussi à la folie. Il est désormais le Green Goblin, l’ennemi juré de Spider-Man, qui mettra à l’épreuve ultime la promesse du jeune Peter Parker de lutter contre le crime et d’aider les innocents.